尊龙凯时细胞培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：生长特性为贴壁生长。冻存条件为无血清冻存液。培养体系采用基础培养基，包含1:1的MCDB105培养基（最终浓度为15g/L碳酸氢钠）与M199培养基（最终浓度为22g/L碳酸氢钠）的混合物，同时添加优质胎牛血清15%及双抗1%。

二、细胞处理与培养

收货后，请将细胞培养至良好状态，并灌满完全培养液，确保瓶口封闭以保持运输细胞的最佳状态。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放置于超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认状态良好。建议在传代后使用一瓶原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养，换液后请将瓶盖稍微拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在汇合度未超过80%时，将瓶装的完全培养液收集至离心管中，保留5ml的完全培养基，之后放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS轻轻冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，并将悬液转移至离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新鲜完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶面积80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后迅速加入5ml完全培养液终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清后，沉淀细胞并加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱中存放，如需转入液氮罐内，应在-80℃冰箱存放24小时以上后再进行转移。

四、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶。之后，使用75%的酒精擦拭冻存管外壁。将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。第二天更换为新鲜完全培养基并继续培养。

五、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会脱落，这属正常现象。如脱离细胞较多，请将培养瓶内的培养液收集至离心管中进行过渡培养，并进行后续对比培养。

六、售后条款

1. 可重发的情况

1. 在运输途中出现的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等问题。
2. 细胞污染问题，需在48小时内提供真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货细胞在静置24小时后或干冰发货细胞在复苏后24小时内绝大部分细胞未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片。
4. 干冰发货细胞复苏后24小时或常温发货细胞静置4小时并未开封出现污染情况。
5. 细胞活性问题，需在7天内提供真实实验结果。
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，3天未告知视为产品合格。
7. 如在4-7天内出现问题，需提供接受细胞前三天的照片和问题发生时的照片及详细操作步骤，经过技术人员评估后可重发。

2. 不予以重发的情况

1. 客户造成的细胞污染。
2. 不当操作导致细胞状态不佳。
3. 非推荐的细胞培养体系引起的细胞状态问题。
4. 细胞状态不好且未提供前三天的培养照片。
5. 进行其他处理后的细胞。
6. 在收到2天内未告知问题。

通过遵循以上步骤及注意事项，您将能更有效地进行细胞培养。有关尊龙凯时的更多信息和支持，请随时联系我们。