细胞焦亡（Pyroptosis）是一种由炎症信号诱导的程序性细胞死亡机制，其显著特征包括细胞膜穿孔与细胞肿胀破裂。这一过程主要依赖于炎性半胱天冬酶（如caspase-1、4、5和11）的活化，并且伴随着大量促炎因子的释放，例如IL-1β和IL-18。与其他细胞死亡方式如凋亡和坏死相比，细胞焦亡在形态学特征、发生机制及其调控方式上均表现出明显差异。

尊龙凯时推出的BBcellProbe®细胞焦亡检测试剂盒，通过比色光度法监测与细胞焦亡相关的蛋白酶Caspase的活性以及细胞质膜的完整性。该试剂盒基于caspase-1/4/5催化Caspase-14/5底物生成黄色的pNA，pNA在405 nm波段强吸收，从而能够通过测定其吸光度来量化细胞焦亡相关蛋白酶的活性。同时，本试剂盒还配备细胞膜非通透性荧光探针，以便检测细胞质膜的破损情况。

使用尊龙凯时的BBcellProbe®，研究者可以通过酶标仪、荧光酶标仪，或容量不超过100 μl的分光光度计和荧光光度计进行细胞焦亡的检测。此外，尊龙凯时还提供AFC、R110和AMC等荧光标记的检测试剂盒，荧光法的灵敏度高于比色法，因此如果具备荧光检测条件，建议优先选择荧光法产品；否则，可以使用比色法检测，需确保样品中细胞焦亡的程度足够显著。

检测方法

• 酶标仪 / 荧光酶标仪
• 分光光度计 / 荧光光度计
• 激光共聚焦显微镜
• 流式细胞仪

样本类型

• 细胞

实验步骤

1. 配制裂解缓冲液和检测缓冲液。
2. 样品处理：
   1. 收集细胞并进行2-3分钟离心，小心移除培养基并尽量吸干，收集细胞。
   2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽量吸走上清。
   3. 在细胞中加入50 μl冷的裂解缓冲液，并高速涡旋混合15秒。
   4. 将样本置于冰上持续振荡25-40分钟。
   5. 在4℃，10000×g条件下离心10分钟。
   6. 将上清液转移入预冷的干净离心管中，并保存在冰上或-80℃冰箱以待后续使用。
3. 对处理后的上清进行蛋白定量。
4. 进行细胞焦亡检测。