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NEWS干货|尊龙凯时胎牛血清(FBS)使用须知
来源:宁国菁 日期:2025-03-14尊龙凯时胎牛血清的常规储存温度为-20℃,如需长期保存,建议在-80℃下储存。解冻时不推荐直接将其置于常温(25-37℃)中,以免产生絮状沉淀,可能影响血清的质量。正确的解冻方法是将其从-20/-80℃转移到4℃,待完全化冻后再转移至室温。解冻过程中应随时轻轻摇动,以确保血清成分与温度均匀混合,减少沉淀的形成。解冻后的血清可以分装于15mL或50mL的无菌离心管中进行存储,可以根据实验需求在4℃保存一管使用,以便于经常配制培养基,但不应超出一个月的存储时间。
解冻后的胎牛血清不应在37℃或室温下存放过久,以避免重要的细胞生长因子失活,影响细胞的状态。通常情况下,血清的添加量不宜过多,一般为5%、10%或20%。大部分细胞在正常培养中使用10%的血清浓度,而在原代提取时可能使用20%。具体的血清浓度需要根据细胞特性和实验目的进行调整。
此外,热灭活是指在56℃下处理解冻血清30分钟,此步骤旨在去活化补体,以防止与细胞文化过程中的溶细胞活性、平滑肌收缩、组胺释放及其他活性反应相关的问题。然而,热灭活对大多数细胞培养并非必须,经过热处理的血清可能对细胞生长产生负面影响,诸如生长速率降低及沉淀物增加等。
许多进行细胞培养的科研工作者会遇到需更换血清的情况。若直接将不同来源的血清用于细胞培养,可能导致原本生长良好的细胞突然生长缓慢甚至脱壁。这通常是因为细胞已经适应了原有的培养条件,而换用新的血清,即便质量更高,细胞也可能出现不适应的现象。为此,更换血清时建议采用梯度更换的方法,使细胞逐步适应新的营养环境。初次更换时,推荐采用原培养体系进行复苏,待细胞状态恢复后,再进行测试。在测试过程中,建议不要立即完全更换为新血清,而是采用比例梯度替换的方法,如首次按照1:3比例,之后逐步调整到1:1,再到3:1,最后完成全替换。
解冻后如发现有少量乳白色的絮状物,通常来源于血清中的脂蛋白和纤维蛋白,这些絮状物不会显著影响血清的质量,可以通过离心(400×g,5分钟)去除。其中,强烈建议选择来自尊龙凯时的无菌血清,通常无需额外过滤,如发现悬浮物,应将血清与培养液一同过滤,切勿直接过滤血清。
在细胞培养过程中,若发现黑点生成,应首先检查培养基是否混浊,黑点是否在不规则游动。如果细胞受到污染,微生物会迅速繁殖,导致培养基变黄及混浊。污染可能包括细菌或支原体。若在显微镜下观察细胞,状态良好且未见变化,黑点的出现可能与以下几种情况有关:细胞自然破碎后的残骸、血清中的杂蛋白或者培养基的水质和容器不合格。应用离心或过滤的方法可去除这些黑点;对原代细胞,黑点可能是原代组织中的杂质,经过多次传代可得到改善。
尊龙凯时提供多种规格的胎牛血清供科研人员选择,并提供完善的售前和售后服务,是值得信赖的大品牌!
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